التفاصيل البيبلوغرافية
| العنوان: |
山羊乳鐵蛋白之純化、分析與美藍還原試驗之相關性研究 ; Purification and analysis of goat lactoferrin concentration and the study of its correlation with the methylene blue reduction test |
| المؤلفون: |
陳文志 |
| المساهمون: |
毛嘉洪 |
| بيانات النشر: |
生命科學院碩士在職專班 |
| سنة النشر: |
2003 |
| المجموعة: |
National Chung Hsing University Institutional Repository - NCHUIR / 國立中興大學 |
| مصطلحات موضوعية: |
lactoferrin, 乳鐵蛋白, enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA, methylene blue reduction test, MBRT, 酵素連結免疫吸附分析法, 美藍還原試驗 |
| الوصف: |
中文摘要 乳鐵蛋白（lactoferrin, LF）為非特異性免疫防禦機制之一種多功能性醣蛋白，廣泛分佈於人及哺乳類動物之外分泌液，尤其在泌乳中被發現具有保護乳房及提供新生動物部份被動免疫之功能。因此，分析生乳中LF濃度含量可能有助於早期監測動物乳腺之健康及乳品質之優劣。故本研究擬嘗試從羊初乳（colostrum）中純化出LF，並發展建立羊LF之競爭型酵素連結免疫吸附分析法 (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)，藉以檢測分析生羊乳中LF之濃度變化，並探討其與羊乳品質之關係。 在本實驗中由健康之阿爾拜因（Alpine）母羊所分泌之初乳，以heparin親合性管柱方法，成功分離純化獲得羊之LF，作為開發ELISA檢測之生物素（biotin）連結體及標準品。利用兔抗牛LF抗體，與純化之羊LF進行瓊脂平板沉降反應，結果兩者之間可明顯產生沉降線。再經SDS-PAGE膠體電泳及Western blotting分析方法確認羊及牛之LF分子量均為80 kDa，並且與兔抗牛LF抗體具特異性親合反應，顯示羊乳及牛乳之LF具有極高的同源性。因此，利用此抗體作為發展羊LF之競爭型ELISA底層抗體（coating antibody）。而在LF連結體之製備則將羊LF與biotin結合，再經棋盤式競爭方法決定出適當的抗體濃度為1:30,000倍、LF連結體濃度為1:25,000，再由LF與LF-biotin之競爭結合建立出標準曲線，結果顯示本方法之檢測敏感度範圍位於3 ng/ml至10 μg/ml之間。 應用本實驗建立之ELISA方法，自91年9月至92年2月止按月從國內某羊乳加工廠，採集經由美藍還原試驗（methylene blue reduction test, MBRT）價收之桶裝生羊乳，進行檢測其LF濃度變化。在分析172個良好品質生羊乳（MBRT≧5.5 至 8小時）樣品中，其MBRT在≦6小時之乳樣本中LF 平均濃度，明顯高於MBRT在> 6 至 8小時之乳樣本（p< 0.01），初步結果顯示在良好生羊乳品質中之LF濃度與MBRT之時間呈現負相關。綜合以上結果顯示，建立羊LF之競爭型ELISA方法可適用於羊乳LF含量之檢測，進而可作為評估羊乳優劣之方法。 ; ABSTRACT Lactoferrin (LF) is a multi-functional glycoprotein in non-specific immune defense mechanism. The secretions in exocrine of human and animals have a lot of LF, which especially exist in the milk for protecting breast and supporting partially acquired immunity in newborn animals. Therefore, to analyze the content of LF concentration in unprocessed milk may be help to monitor the health condition of animals mammary gland and the quality of milk in early lactation stage. The purpose of these studies was to purify LF from caprine colostrum and to construct the competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) of caprine LF for examine the change of LF concentration in unprocessed milk, as well as to discusse the correlation of LF and quality of caprine milk. In these studies, firstly, we use heparin affinity column to purify caprine LF of Alpine goat colostrum. The LF was used to be the LF-biotin conjugate and to be the standard for ELISA. The agar-plate precipitation reaction involved the reaction of caprine LF with rabbit anti-cattle LF antibody, which ... |
| نوع الوثيقة: |
thesis |
| اللغة: |
English |
| Relation: |
http://hdl.handle.net/11455/22090 |
| الاتاحة: |
http://hdl.handle.net/11455/22090 |
| Rights: |
none |
| رقم الانضمام: |
edsbas.C96BC707 |
| قاعدة البيانات: |
BASE |